細(xì)胞凍存中的注意事項(xiàng)：細(xì)胞凍存開始時(shí)，要溫好相應(yīng)的培養(yǎng)基和相應(yīng)的試劑，以及計(jì)數(shù)耗材，避免操作過(guò)程中手忙腳亂。用移液管吹打相應(yīng)的胞液時(shí)，要保證移液管在液面以下吹打，管內(nèi)要有液體，防止產(chǎn)生相應(yīng)的氣泡，氣泡的張力會(huì)影響細(xì)胞的活率和生存狀態(tài)。計(jì)數(shù)細(xì)胞時(shí)要保證取胞液時(shí)也要混勻，這個(gè)過(guò)程比較重要，細(xì)胞不混勻，計(jì)數(shù)不準(zhǔn)，此外吹打應(yīng)該輕柔，避免細(xì)胞在吹打的過(guò)程中出現(xiàn)了相應(yīng)的死亡。凍存離心用50ml離心管比較好，加凍存液吹打混勻比較方便，離心后不能過(guò)多地晃動(dòng)離心管。當(dāng)離心管液體較多的時(shí)候，可以直接傾倒，不要磕，多余的液體較好用泵吸出比較好。凍存支數(shù)少的情況，用泵頭輕柔吹打，避免出現(xiàn)氣泡，凍存支數(shù)多用移液管吹打。無(wú)血清凍存液用途：無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于免疫細(xì)胞及干細(xì)胞的存儲(chǔ)。武漢無(wú)血清細(xì)胞凍存液服務(wù)電話

凍存細(xì)胞注意事項(xiàng)：冷凍保護(hù)劑可降低培養(yǎng)基的冰點(diǎn)，并可減緩冷卻速度，較大降低冰晶形成的危險(xiǎn)(冰晶可損傷細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞死亡)。注：DMSO可促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。操作含DMSO的試劑時(shí)，應(yīng)采用與此類物質(zhì)安全危害相適應(yīng)的設(shè)備和操作規(guī)范，并應(yīng)按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置此類試劑。建議可使用廠商生產(chǎn)的無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使用方便，復(fù)蘇率高。注意冷凍保護(hù)劑DMSO的品質(zhì)：DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，無(wú)菌且無(wú)色，以5-10ml小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍石家莊正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液?jiǎn)蝺r(jià)鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來(lái)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存液的操作步驟：1.配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液;2.取對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的體細(xì)胞，除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS清理。3.除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細(xì)胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長(zhǎng)發(fā)育的體細(xì)胞消化吸收出來(lái);4.抽濾1000rpm，5min;5.除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液，用塑料吸管輕輕地吹打使體細(xì)胞勻稱，記數(shù)，調(diào)整凍存液中體細(xì)胞的較后相對(duì)密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.將體細(xì)胞分裝進(jìn)凍存管中，每管1～1.5ml;7.在凍存管上標(biāo)出體細(xì)胞的名字，凍存時(shí)間及作業(yè)者;8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃下列時(shí)，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時(shí)，則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細(xì)胞的凍存管放進(jìn)-20℃電冰箱2h，隨后放進(jìn)-70℃電冰箱中留宿，取下凍存管，移進(jìn)液氮容器內(nèi)。

以前在另一家實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候，凍存細(xì)胞根本就沒有講究這些標(biāo)準(zhǔn)操作。凍存的細(xì)胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細(xì)胞）、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。將細(xì)胞酶消化后直接參與離心，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0)，直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中，較久保存，幾年后細(xì)胞的活力仍沒有什么受損，照常能復(fù)蘇，成活率高。但有三點(diǎn)須注意：（1）一是細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)要好，不能長(zhǎng)得過(guò)稀，同樣也不能過(guò)密，細(xì)胞的狀態(tài)看起來(lái)相當(dāng)健康。70%密度的要保存的細(xì)胞須再長(zhǎng)24h才能全滿，萬(wàn)一細(xì)胞狀態(tài)不好，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細(xì)胞的量要留心，不能太密也不能太稀，一般1OOmm培養(yǎng)皿的細(xì)胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細(xì)胞，半年還有30%~50%的細(xì)胞有活性，但一年的細(xì)胞就沒有活的。凍存細(xì)胞可直接存放于-80℃冰箱，穩(wěn)定保存數(shù)年。

永生化的細(xì)胞系往往相當(dāng)健壯，因此，使用實(shí)驗(yàn)室自制的凍存培養(yǎng)基，效果也不錯(cuò)。典型的配方是在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清，或只是在血清中加入10%的DMSO。DMSO的作用是取代細(xì)胞中的一些水，以防止冰晶形成，刺穿細(xì)胞。據(jù)賽默飛世爾科技的較深科學(xué)家RhondaNewman介紹，DMSO還能防止細(xì)胞在冷凍期間發(fā)生收縮，而后在解凍時(shí)又變得腫脹。血清，這種富含營(yíng)養(yǎng)成分的物質(zhì)，直接支持細(xì)胞?！爱?dāng)細(xì)胞處于這種營(yíng)養(yǎng)豐富的環(huán)境時(shí)，它們能夠更好地復(fù)蘇。無(wú)血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì)：不含血清，較大減少細(xì)胞污染。徐州北京無(wú)血清細(xì)胞凍存液

無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用方法：按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)。武漢無(wú)血清細(xì)胞凍存液服務(wù)電話

細(xì)胞凍存時(shí)間和操作步驟：1、首先我們需要凍存培養(yǎng)液，通常細(xì)胞凍存液含10%的DMSO，或者是甘油、10-20%的小牛血清；、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，并且還需要用PBS進(jìn)行清洗，需要注意在這里要丟棄掉舊的細(xì)胞凍存液；3.去除PBS，加入適量的胰蛋白酶，以覆蓋住培養(yǎng)皿表面為宜，然后把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化掉；然后離心1000rpm5min時(shí)間；4、去除胰蛋白酶，加入凍存培養(yǎng)液，輕輕吹打使細(xì)胞的分布變得均勻，調(diào)節(jié)細(xì)胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml，需要注意這是較佳的細(xì)胞密度；5、將細(xì)胞裝入凍存管之中，每管的含量應(yīng)該保持在1～1.5ml之間。在凍存管上標(biāo)明細(xì)名稱、時(shí)間、操作者；6、較后要說(shuō)的就是細(xì)胞凍存的時(shí)間了，對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序來(lái)說(shuō)，需要進(jìn)行梯度降溫，降溫速率-1～-2℃/min，一旦溫度達(dá)到-25℃以下時(shí)，那么就可增至-5℃～-10℃/min；等到-100℃的時(shí)候，可迅速的放入到液氮之中。武漢無(wú)血清細(xì)胞凍存液服務(wù)電話