COIP常見問題及對(duì)策

1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?

磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān)，請(qǐng)確 認(rèn)抗體的類型與 Protein A/G 配基的親和效率。如抗體所屬亞型與 Protein A/G的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時(shí)間（ 30～120min）、提高結(jié)合緩沖液的pH值（8～9）及降低離子強(qiáng)度（ 25～100mM NaCl）等方法提高親和效率。

2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?

可以先將抗體與樣品進(jìn)行孵育，形成抗體-抗原復(fù)合物，再用 Protein A/G磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效 率，并降低磁珠與樣品接觸的時(shí)間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對(duì) 于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。 免疫磁珠法分離膽囊CancerCD133陽性細(xì)胞及其生物學(xué)特性鑒定。天津anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠生產(chǎn)廠家

用多聚抗原肽(multipleantigenpeptides,MAP)包被磁珠制備單表位抗體的方法.方法:通過Fmoc法固相化學(xué)合成UreB的8分支單表位MAP,將其作為免疫原免疫小鼠,獲得多克隆抗血清.將MAP以共價(jià)偶聯(lián)的方式包被磁珠制備免疫磁珠(immunomagneticbeads,IB),通過IB從多克隆抗血清中純化單表位抗體,熒光偏振(fluorescencepolarization,FP)法鑒定抗體的特異性,SDS-PAGE鑒定抗體純度,紫外分光光度法測(cè)定其回收率.結(jié)果:合成的MAP具有較強(qiáng)的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗體滴度高達(dá)1∶12800.MAP制備免疫磁珠的比較好包被濃度為100mg/L,包被效率比較高可達(dá)79%.應(yīng)用MAP免疫磁珠從抗血清中純化得到的單表位抗體,經(jīng)鑒定與其他抗原表位無反應(yīng)性,其純度為95%,抗體的回收率為5.8%.結(jié)論:MAP包被的磁珠可快速分離純化出針對(duì)某一抗原表位的特異性抗體,其性質(zhì)類似單克隆抗體.這一方案在快速制備少量高特異性抗體中具有廣闊的應(yīng)用前景.天津anti-Flag COIP免疫磁珠生產(chǎn)廠家納米免疫磁珠富集單核增生李斯特菌的研究。

檢測(cè)EPCAM、MUC16兩種抗原在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性。方法分別用羧基磁珠制備EPCAM、MUC16兩種免疫磁珠,分3組:EPCAM免疫磁珠檢測(cè)組、MUC16免疫磁珠檢測(cè)組、2種磁珠均等混合檢測(cè)組。對(duì)來源于同一患者的等體積外周血樣本進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè),HE染色后鑒定檢測(cè)值。結(jié)果EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠對(duì)同體積、同來源樣本檢測(cè)值分別為22±11、14±6、28±12個(gè)腫瘤細(xì)胞(P0.05),說明檢測(cè)效率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論MUC16與EPCAM在上皮性卵巢*循環(huán)腫瘤細(xì)胞中**表達(dá)且存在差異,因此增加MUC16這一***標(biāo)志物可有效提高上皮性卵巢*CTCs檢出數(shù)量。

免疫磁珠法原代分離純化大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞,并確定其免疫組化特征.方法免疫磁珠法結(jié)合傳統(tǒng)的膠原酶消化及篩網(wǎng)過濾法分離出大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞,采用含有20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng).通過周細(xì)胞的形態(tài)和生長方式初步鑒別,再進(jìn)行細(xì)胞α-SMA,vWF,GFAP抗體免疫組織化學(xué)特征鑒定,及激光共聚焦顯微鏡行周細(xì)胞PDGFR-β和desmin抗體熒光雙標(biāo)觀察.周細(xì)胞生長曲線通過MTT法測(cè)定.結(jié)果本法獲得的周細(xì)胞純度可達(dá)98%,并能連續(xù)傳代.原代周細(xì)胞約2～3周融合,傳代后生長和融合速度加快,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,胞內(nèi)可見絲狀結(jié)構(gòu),無接觸性抑制.免疫組化證實(shí)周細(xì)胞胞漿內(nèi)α-SMA蛋白表達(dá)陽性,內(nèi)皮細(xì)胞特異性vWF因子表達(dá)陰性,膠質(zhì)細(xì)胞特異性GFAP表達(dá)陰性.激光共聚焦顯示周細(xì)胞PDGFR-β和desmin抗原表達(dá)均為陽性.結(jié)論本研究***報(bào)道應(yīng)用免疫磁珠法分離培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞.獲得高度純化的周細(xì)胞具有明確的免疫組化特征,可用于相關(guān)視網(wǎng)膜血管性疾病的進(jìn)一步研究.BEENbio Anti Myc Co-IP&CHIP磁珠廠家直銷。

人骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨間充質(zhì)祖細(xì)胞的免疫磁珠分選和鑒定。天津anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠生產(chǎn)廠家

隨著我國經(jīng)濟(jì)社會(huì)邁入新時(shí)代，化工行業(yè)在增強(qiáng)供給、高端供給和高質(zhì)量供給上持續(xù)發(fā)力，也將面臨如何努力正確探索平穩(wěn)健康運(yùn)行和高質(zhì)量發(fā)展的新機(jī)遇。雖然近年來我國化工行業(yè)整體規(guī)模飛速壯大，但有限責(zé)任公司（自然）企業(yè)競爭力、收入能力、人均收入等方面指標(biāo)與發(fā)達(dá)地區(qū)差距較大，在人均收入等部分指標(biāo)上我國部分企業(yè)不足全球優(yōu)先企業(yè)的1/10。加快提升企業(yè)重點(diǎn)競爭力，培育具有競爭優(yōu)勢(shì)的企業(yè)和企業(yè)集團(tuán)，是我國化工產(chǎn)業(yè)必須要下大力氣補(bǔ)齊的短板。建議加快培育創(chuàng)新型企業(yè)，通過各種手段支持企業(yè)建立工程技術(shù)中心等研發(fā)機(jī)構(gòu)，著力帶領(lǐng)自主創(chuàng)新科研試劑、耗材、儀器，納米脂質(zhì)體，細(xì)胞、分子、蛋白實(shí)驗(yàn)，科研項(xiàng)目產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目。通過招商型的優(yōu)化和升級(jí)，化工行業(yè)已經(jīng)從初期的以“三廢治理”為主，發(fā)展為包括環(huán)保產(chǎn)品、環(huán)境服務(wù)、潔凈產(chǎn)品、廢物循環(huán)利用，跨行業(yè)、跨地區(qū)，產(chǎn)業(yè)門類基本齊全的產(chǎn)業(yè)體系。天津anti-HA 免疫共沉淀免疫磁珠生產(chǎn)廠家

上海普平生物科技有限公司致力于化工，以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)高品質(zhì)管理的追求。公司自創(chuàng)立以來，投身于科研試劑、耗材、儀器，納米脂質(zhì)體，細(xì)胞、分子、蛋白實(shí)驗(yàn)，科研項(xiàng)目，是化工的主力軍。普平生物不斷開拓創(chuàng)新，追求出色，以技術(shù)為先導(dǎo)，以產(chǎn)品為平臺(tái)，以應(yīng)用為重點(diǎn)，以服務(wù)為保證，不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值，提供更優(yōu)服務(wù)。普平生物始終關(guān)注自身，在風(fēng)云變化的時(shí)代，對(duì)自身的建設(shè)毫不懈怠，高度的專注與執(zhí)著使普平生物在行業(yè)的從容而自信。